l 技術簡介

荷蘭U-CyTech公司是很早從事無血清ELISPOT檢測技術研究并且取得卓越成果的公司之一。值得驕傲的是達科為公司也參與了U-CyTech的很大一部分研究工作，獲得了聯合的知識產權。達科為公司獲得授權，于2006年開始在國內生產達優?無血清培養基。

由于涉及到專利的問題，這里只對無血清ELISPOT檢測技術作一個簡單的介紹。通俗地說，就是知道血清中維持淋巴細胞活力所必需的成分后（包括營養代謝成分、細胞信號成分和多種生長因子），把它們做成原料，添加到空白培養基中。然后需要反復驗證這些添加成分，保證它們能夠滿足以下三個要求：

2 維持淋巴細胞存活，保持細胞活力和免疫功能狀態；

2 不會額外刺激陰性細胞額外產生任何一種細胞因子；

2 不會抑制陽性細胞分泌各種細胞因子。

目前，我們同時提供U-CyTech原產的Lympho-Spot?無血清培養基和U-CyTech授權達科為在國內生產的達優?無血清培養基。它們的原料來源與質控標準完全相同，能獲得同樣出色的檢測結果。由于物種的差異，部分添加成分在靈長類和嚙齒類之間有差別。U-CyTech公司采取了同時添加的策略，所以生產出的是通用達優?無血清培養基；達科為公司采取的是分別添加的策略，所以生產出的是專用達優?無血清培養基，分靈長類和嚙齒類兩個品種。詳細的差別見下表。

l 使用方法

達優?無血清培養基的目的在于為檢測細胞提供一個不受血清干擾的培養環境。在細胞洗滌棄上清之后，用Lympho-Spot?無血清培養基重懸。之后做細胞計數，用Lympho-Spot?稀釋到需要的濃度，加入ELISPOT孔中即可。此外，刺激物好也用Lympho-Spot?溶解和稀釋。

l 無血清ELISPOT檢測的實際效果

達科為公司做了一系列的有、無血清ELISPOT檢測對比試驗，并且在推廣ELISPOT技術的標準化以及建立ELISPOT檢測的質控系統時，都采用了無血清ELISPOT檢測技術。在所有的實驗中達優?都取得了優于血清的結果。總結起來就是：背景更干凈，信噪比更高，頻率更穩定，結果更真實。下圖5.1是一些實際案例。